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    動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)步驟
  • 更新日期:2024-08-27      瀏覽次數(shù):854
    • 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)條件

      1、無菌、無毒的環(huán)境:對(duì)培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進(jìn)行無菌處理,通常還要在培養(yǎng)液中加入一定量的的抗生素,以防被污染。此外應(yīng)定期更換培養(yǎng)液,以便清除代謝產(chǎn)物防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物累積對(duì)細(xì)胞自身產(chǎn)生危害。

      2、營養(yǎng)物質(zhì):無機(jī)物(無機(jī)鹽、微量元素等),有機(jī)物(糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子等)

      3、血清和血漿(
      提供細(xì)胞生長(zhǎng)必須的營養(yǎng)成份)


      4、溫度和pH(36.5±0.5℃,7.2~7.4)

      5、氣體環(huán)境(95%的空氣+5%CO?的混合氣體)

      6、其中5%CO?氣體是為保持培養(yǎng)液的pH穩(wěn)定

      動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)步驟

      注:所有步驟應(yīng)在無菌無毒的超凈工作臺(tái)進(jìn)行。胰蛋白酶處理時(shí)間不宜過長(zhǎng)。

      取離體的動(dòng)物組織,器官或細(xì)胞,剪碎并加入胰蛋白酶分解成單個(gè)細(xì)胞,配置形成細(xì)胞懸液。

      制備動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液體培養(yǎng)基(需加入血清,保證無菌無毒),將細(xì)胞接種至培養(yǎng)基,放入二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行初代培養(yǎng)。

      當(dāng)細(xì)胞增殖達(dá)到一定程度,出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象時(shí),用胰蛋白酶再次處理,并用細(xì)胞懸液吹打貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞。進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

      依照計(jì)數(shù)結(jié)果,分瓶培養(yǎng),進(jìn)行傳代培養(yǎng)。獲得細(xì)胞系或細(xì)胞株。

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